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“枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效分泌表达研究”获重大成果

2008-05-15 16:58:41  作者:  来源:互联网  浏览次数:18  文字大小:【】【】【

枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效分泌表达研究”获重大成果    

    该成果采用PCR 技术,克隆了枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶的编码基因。序列分析表明,该基因编码-24.1 kD的成熟蛋白。根据毕赤酵母密码子的偏好性对该β-1,3-1,4-葡聚糖酶的编码基因进行了密码子优化设计和从头全新合成,构建了毕赤酵母表达载体,电击转化,抗生素筛选,获得了高效表达外源基因的重组工程菌株。利用10L全自动发酵罐对重组菌株进行了高密度发酵研究,在甲醇的诱导下,实现了该β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效分泌表达。该菌株在10L发酵罐中高密度发酵培养,在甲醇的诱导下,每mL发酵液产酶蛋白5mg,在最适条件下,发酵液的β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性为15.000U/mL。酶学性质分析表明,该葡聚糖酶最适催化温度为40℃,接近动物的体内温度。酶的最适催化pH值为6.4。该酶在弱酸性到中性条件下都有较高的催化活性,且对多种金属离子及化学因子有较好的耐受性,适合用于猪、鸡等单胃动物的饲料添加剂使用。 

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