“枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效分泌表达研究”获重大成果    

    该成果采用PCR 技术，克隆了枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶的编码基因。序列分析表明，该基因编码-24.1 kD的成熟蛋白。根据毕赤酵母密码子的偏好性对该β-1,3-1,4-葡聚糖酶的编码基因进行了密码子优化设计和从头全新合成，构建了毕赤酵母表达载体，电击转化，抗生素筛选，获得了高效表达外源基因的重组工程菌株。利用10L全自动发酵罐对重组菌株进行了高密度发酵研究，在甲醇的诱导下，实现了该β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效分泌表达。该菌株在10L发酵罐中高密度发酵培养，在甲醇的诱导下，每mL发酵液产酶蛋白5mg,在最适条件下，发酵液的β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性为15.000U/mL。酶学性质分析表明，该葡聚糖酶最适催化温度为40℃，接近动物的体内温度。酶的最适催化pH值为6.4。该酶在弱酸性到中性条件下都有较高的催化活性，且对多种金属离子及化学因子有较好的耐受性，适合用于猪、鸡等单胃动物的饲料添加剂使用。